羊脆木树皮的化学成分研究(Ⅰ)

采用硅胶柱色谱、重结晶、高效液相色谱半制备法等方法,对羊脆木(Pittosporum kerrii Craib)树皮的氯仿、甲醇部位进行化学成分研究,分离纯化得7个单体,通过波谱分析鉴定其结构,分别为:β-stigmsterol(1)、β-stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside(2)、ethyl caffeate(3)、2,6-dimethoxy-1,4-benzoquinone(4)、3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid(5)、syringaresinol-4,4′-di-O-β-D-glucoside(6)、3,4,5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside(7),其中4、5为首次从该属中分离得到.细胞毒试验表明氯仿提取物及从其中分离出来的化合物3、4都具有明显的细胞毒活性,对K562细胞的IC50分别为3.7、4.0、3.0μg/mL.     

粘质沙雷氏菌抗铜基因的克隆及性质研究

 通过构建粘质沙雷氏菌KMR-3菌株的基因组DNA文库,克隆到了与该菌的铜抗性相关的基因,并对其部分特性进行了研究.结果表明克隆到的铜抗性基因所编码的蛋白属于CutF蛋白,由194个氨基酸编码,与莫氏耶尔森氏菌(Yersinia mollaretii)ATCC43969抗铜脂蛋白NlpE同源性最高,达到70%,并对该基因的调控序列(启动子、终止子、SD序列及转录起始位点)进行了分析.     

粘质沙雷氏菌脂肪酶的分离纯化

粘质沙雷氏菌L-42发酵液经离心、丙酮沉淀、离子交换层析以及凝胶过滤等步骤,获得了比活性为1166.61 U/mg 的碱性脂肪酶,提取得率为20%,纯化倍数45.57倍,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上均呈现单一蛋白质条带,显示该酶为单体,SDS-PAGE测得酶的相对分子量约为 50 kDa.酶学特性研究结果表明,该酶的最适反应温度为35 ℃,最适pH值为9.0,在50 ℃以下、pH6.0~10.0范围内保持较好的稳定性. Ca2+、Mg2+ K+、Mn2+、Ni+等对酶有激活作用,而Fe2+、Zn2+、Co2+等对酶活有抑制作用.     

粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析

克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因lip18,实现其在大肠杆菌中的表达,并进行酶学性质研究.克隆脂肪酶基因lip18,并构建p ET-28a(+)-lip18重组表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导优化重组蛋白表达,并研究其酶学性质.克隆得到脂肪酶基因lip18,全长为1 842 bp,编码614个氨基酸.重组菌的诱导温度对蛋白表达影响很大,在最适诱导温度为20℃时脂肪酶大量表达,重组脂肪酶的相对分子质量约为65 ku.酶学性质研究表明:重组酶高效水解C10~C16的中、长链脂肪酸,最适作用温度30℃,最适作用pH值7.0,并且在0℃条件下有一定的催化活性,热稳定性差,是低温中性脂肪酶;同时,对有机溶剂有较好的耐受性.     

牛乳酪蛋白源ACE抑制肽的稳定性和毒理特性研究

研究目的：创新要点：研究方法：重要结论：酸碱热处理对牛乳酪蛋白源血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽的抑制活性、游离氨基、色泽及其毒理特性的影响。在pn9.0-12．0的热处理条件下,牛乳酪蛋白源ACE抑制肽的抑制活性降低,色泽加深。热处理后的ACE抑制肽对Caco-2细胞和ECV-304细胞没有毒性作用。以ACE抑制活性、游离氨基、色差值和细胞存活率为检测指标,研究了酸碱热处理对ACE抑制肽的稳定性和毒理特性影响。高温和碱性热处理能破坏酪蛋白源ACE抑制肽的稳定性（见图1～3）。     

溴代香豆素对胃癌细胞的细胞毒活性与致死机制研究

为探究合成化合物溴代香豆素的生物活性,将该化合物作用于胃癌细胞进行了体外研究.本研究分别采用磺酰罗丹明染色法和生长曲线法研究了药物的细胞毒活性和癌细胞的致死过程.以彗星电泳技术和瑞士—吉姆萨染色法观察了化合物对细胞核形态变化和核酸损伤效应,最后以琼脂糖凝胶电泳法检测了药物对细胞总DNA的影响.结果显示,溴代香豆素对胃癌细胞具有显著的细胞毒活性,其IC50为21.56μg/m L.药物对细胞的增殖抑制效应和致死效应都具有显著的时间—剂量依赖性.药物作用癌细胞后可引起细胞核形态变化和染色质凝集断裂,并损伤细胞DNA,在电泳中呈梯度降解状态.结果表明,溴代香豆素对胃癌细胞的生长与增殖具有显著的细胞毒活性,并能诱导胃癌细胞发生凋亡.     

一株高产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选与鉴定

通过筛选自然生境中的产色素菌株,从淡水鱼体中分离得到一株高产红色色素的Sm-128菌株.经形态观察、生理生化实验和16S rDNA基因序列分析,鉴定Sm-128菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).结合紫外吸收光谱及薄层色谱分析,证实Sm-128菌株所产色素为灵菌红素,粗品产量达475 mg/L.     

Synthetic and biological studies on a cyclopolypeptide of plant origin

Objective： A natural cyclic peptide previously isolated from Citrus medica was synthesized by coupling of tetrapeptide units Boc-Leu-Pro-Trp-Leu-OMe and Boc-Ile-Ala-Ala-Gly-OMe after proper deprotection at carboxyl and amino terminals followed by cyclization of linear octapeptide segment. Methods： Solution phase technique was adopted for the synthesis of cyclooctapeptide-sarcodactylamide. Required tetrapeptide units were prepared by coupling of Boc-protected dipeptides viz. Boc-Leu-Pro-OH and Boc-Ile-Ala-OH with respective dipeptide methyl esters Trp-Leu-OMe and Ala-Gly-OMe. Cyclization of linear octapeptide unit was done by p-nitrophenyl ester method. The structure of synthesized cyclopolypeptide was elucidated by FTIR, ^1H NMR, ^13C NMR, FABMS spectral data and elemental analysis. The newly synthesized peptide was evaluated for dif- ferent pharmacological activities including antimicrobial, anthelmintic and cytotoxic activities. Results： Synthesis of sarcodactylamide was accomplished with 〉78% yield utilizing dicyclohexylcarbodiimide （DCC） as coupling agent. Newly synthesized peptide possessed potent cytotoxic activity against Dalton＇s lymphoma ascites （DLA） and Ehrlich＇s ascites carcinoma （EAC） cell lines, in addition to moderate anthelmintic activity against earthworms Megascoplex konkanensis, Pontoscotex corethruses and Eudrilus sp. Moreover, cyclopolypeptide displayed good antimicrobial activity against pathogenic fungi Candida albicans and Gram-negative bacteria Pseudomonas aeruginosa, in comparison to standard drugs griseofulvin and ciprofloxacin. Conclusion： Solution phase technique employing DCC and triethylamine （TEA） as base proved to be effective for the synthesis of natural cyclooctapeptide. N-methyl morpholine （NMM） was found to be a better base for the cyclization of linear octapeptide unit in comparison to TEA and pyridine.     

硒代4-脱氧-4′-去甲表鬼臼毒素衍生物的合成及细胞毒性测定

应用硼氢化钠还原法合成四种硒代鬼臼毒素衍生物。反应条件温和 ,无毒害 ,产率较高。通过红外吸收谱图、核磁谱图和质谱分析与目标产物一致。四种衍生物对卵巢癌细胞HO -8910都具有一定的细胞毒作用 ,并与化合物浓度呈明显正相关。     

粘质沙雷氏菌( Serratia marcescens) 的研究Ⅰ-Serratia marcescens 9 - 2 菌株分离、分类鉴定和形态特征

9-2菌株为革兰氏阴性短杆菌,周生鞭毛,菌落红色,经自动微生物鉴定系统(VITECK-AMS-CC2)鉴定9-2菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),鉴定为99%;9-2菌株对丁氨卡那、强力霉素、复方新诺明、氟哌酸和庆大霉素敏感,对卡那霉素中敏,对呋喃唑酮、头孢唑啉、氯霉素、链霉素、呋喃妥因、红霉素、青霉素G、氨苄青霉素和四环素不敏感;能产生灵杆菌素.